彗星法单细胞水平DNA损伤分析

彗星图片由Marie Vasquez提供，Helex 3公司。

什么是彗星试验?

不，这不是天文学上的一种技术，通过扫描太阳系内外来评估人类步恐龙后尘的风险!对于那些做“单细胞凝胶电泳”的人来说，Comet是一种在单个细胞水平上评估和定量DNA损伤和修复的高度敏感和高效的手段，适用于任何真核细胞。发生的DNA损伤类型包括单/双链断裂、DNA-药物交联、DNA-蛋白质或DNA-DNA交联和氧化性DNA碱基损伤。彗星这个名字的由来是因为这些样本看起来像一颗彗星，头部和尾部延伸到不同的长度，相对于DNA的完整性或损伤程度。

彗星技术

Comet技术的基础是将凝胶电泳应用于染色的核酸样本，然后对迁移产物进行荧光显微镜分析。

• DNA用荧光染料染色
• 进行凝胶电泳
• 产物随后在荧光显微镜下成像。

DNA损伤分析

由此产生的结构让人联想到彗星，由细胞核头部和受损DNA的尾部组成。在电泳过程中，断裂的DNA片段从细胞核中迁移出去，DNA损伤的程度可以通过测量头部和尾部之间的相对DNA %来量化。重要的是，DNA损伤的确切类别可以通过仔细控制细胞制备条件来检测。例如，用于将DNA损伤位点转化为DNA片段(Comet检测必不可少)的碱处理(pH控制)的程度可以区分不同类型的链断裂。DNA碱基修饰的位点可以通过引入酶来转化为DNA片段，酶对这种损伤具有特异性作用。此外，DNA交联和结合也可以通过Comet试验检测，通过确定这些相互作用延缓DNA迁移的程度。自“撞击”以来，Comet已成为毒理学、细胞凋亡、DNA修复、衰老、细胞周期分析和自由基生物学等领域的核心技术。

彗星载玻片在荧光显微镜下检查，通常使用宽视场荧光显微镜。宽视场epifluorescence显微镜已经发展成为一种普遍可用的技术，用于研究荧光标记的细胞和组织。在过去的几十年里，由于荧光探针、标记化学、光学仪器(如滤光片和物镜)和探测器技术的改进，这一趋势得到了加速。

宽视场技术包括通过波长或小波长范围对视场进行泛光照明(通常使用激励滤波器和弧光灯)。斯托克位移荧光发射通过二向色光传输，最初用于将较短波长的激发光反射到样品上，再次通过发射滤光片(通常称为阻挡滤光片)进行光学过滤，并聚焦到相机探测器上。

彗星:为彗星实验提供解决方案

Komet是Andor的软件解决方案，用于通过分析和评估DNA损伤进行图像采集。Komet 7和Komet 7- glp是由Kinetic Imaging于1992年首次发布的原始Komet软件的最新版本。Komet 7和Komet 7- glp采用了经合组织在过去25年以上的经验基础上提出的新要求。Komet 7保持了对数百个现有用户的向后兼容性，同时还使用最新的计算机系统(包括Windows 10支持)、摄像头(通过虚拟摄像头功能)和新光源开发提供了新的可能性。Komet仍然是可用于研究的最高度参考的彗星分析溶液。